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萜類化合物是天然產(chǎn)物中最大的類群,結(jié)構(gòu)多樣、活性廣泛,具有重要的藥用和經(jīng)濟價值。植物合成萜類化合物目的通常被認為是調(diào)節(jié)其自身生長發(fā)育(如植物激素赤霉素、脫落酸和獨腳金內(nèi)酯)以及抵御各種生物脅迫(如昆蟲拒食劑印楝素和除蟲菊酯)。倍半萜為萜類化合物中的一個重要家族,具有豐富的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物功能雙重多樣性。其中,杜松烯類倍半萜由于其獨特的活性與功能受到廣泛關(guān)注,如抗瘧疾藥物青蒿素和植保素棉酚等。
紫莖澤蘭(Eupatorium adenophorum Spreng)在我國是一種外來入侵植物,具有強大的化學(xué)防御系統(tǒng),其防御物質(zhì)及生物合成機制尚屬未知。近期,中國科學(xué)院昆明植物研究所活性天然產(chǎn)物發(fā)現(xiàn)與生物合成團隊研究員黎勝紅研究組綜合運用植物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、合成生物學(xué)等技術(shù),揭示紫莖澤蘭中杜松烯類倍半萜的體內(nèi)外抗蟲防御功能,解析其生物合成途徑的關(guān)鍵步驟,并構(gòu)建杜松烯類天然產(chǎn)物的異源合成通路。
經(jīng)各種誘導(dǎo)處理以及代謝分析,該研究發(fā)現(xiàn),6個杜松烯類倍半萜是紫莖澤蘭的主要組成型和誘導(dǎo)型防御物質(zhì),這些化合物均表現(xiàn)出顯著的昆蟲拒食活性。在此基礎(chǔ)上,研究人員對杜松烯類倍半萜的生物合成開展了研究,從紫莖澤蘭中克隆并功能鑒定了3個倍半萜合酶基因,包括一個新穎的倍半萜合酶EaTPS1,能夠催化其中2個關(guān)鍵中間體amorpha-4,7(11)-diene 和 (–)-amorph-4-en-7-ol的合成;在大腸桿菌中構(gòu)建了這兩個化合物的從頭合成通路,從10 L搖瓶培養(yǎng)液中分離純化了550 mg的amorpha-4,7(11)-diene和35 mg的(–)-amorph-4-en-7-ol單體化合物,并通過1D和2D NMR等波譜技術(shù)確證其結(jié)構(gòu)?;虮磉_模式和化合物積累的相關(guān)性分析,證實EaTPS1在紫莖澤蘭中參與杜松烯類倍半萜的生物合成,并發(fā)現(xiàn)機械損傷和MeJA處理降低EaTPS1基因的表達但能促進化合物的釋放。在煙草中瞬時表達EaTPS1基因,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因煙草也能合成amorpha-4,7(11)-diene 和 (–)-amorph-4-en-7-ol,同時抗蟲防御功能也得到提高,進一步證實EaTPS1在植物體內(nèi)的功能。該研究首次揭示紫莖澤蘭的化學(xué)防御物質(zhì)及其形成機制,并實現(xiàn)杜松烯類倍半萜的異源合成,有助于深入研究該類天然產(chǎn)物的生物活性和合成生物學(xué)。
研究結(jié)果以Characterization of defensive cadinenes and a novel sesquiterpene synthase responsible for their biosynthesis from the invasive Eupatorium adenophorum為題,發(fā)表在New Phytologist上。昆明植物所副研究員劉燕和沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)教授駱世洪為并列第一作者,黎勝紅為通訊作者。研究得到國家杰出青年基金項目、云南生物醫(yī)藥重大專項、云南省創(chuàng)新團隊、中科院青年創(chuàng)新促進會和中科院“西部之光”專項基金等資助。
杜松烯類倍半萜生物合成途徑(左圖)以及EaTPS1基因表達模式和化合物積累(右圖)
工程大腸桿菌(左圖)和本氏煙草(右圖)異源合成amorpha-4,7(11)-diene 和 (–)-amorph-4-en-7-ol
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